Tipificación del cassette cromosómico estafilocócico de Staphylococcus aureus resistentes al meticilino en el estado de Aragua, Venezuela / Typification of the staphylococcal chromosome cassette of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in the state of Aragua, Venezuela

RESUMEN Objetivos: Tipificar el casette SCCmec en cepas de Staphylococcus aureus resistentes a meticilino (SARM) en aislados clínicos de centros de salud del Estado Aragua-Venezuela y comparar la presencia de los genotipos SCCmec entre los centros de salud del estado y según el tipo de infección. Materiales y métodos: Durante enero y agosto de 2015 se estudiaron 81 cepas SARM de cuatro centros de salud del estado de Aragua en Venezuela. La resistencia al meticilino se midió con el método de Kirby-Bauer con discos de oxacilina (1 µgr) y cefoxitina (30 µgr). El gen mecA y el SCCmec se analizaron por la técnica de reacción en cadena de polimerasa múltiple. Resultados: 55 aislados (67,9%) amplificaron el gen mecA, y 24 cepas (43,6%) amplificaron el SCCmec. El SCCmec I fue el más frecuente, seguido de SCCmecIV y SCCmec III, representaron el 62,5%, 25% y 12,5%, respectivamente. El SCCmec I fue predominante en el centro de salud A (80%), mientras que el SCCmec IV se encontró en el centro de salud B (60%) y C (100%). En el centro de salud D, 50% resultó ser SCCmec I y 50% SCCmec IVd. Se encontró relación entre el SCCmec y el centro de salud con significancia estadística. En infecciones de piel y tejidos blandos y en las respiratorias predominó el SCCmec I con 63,2% y 50% respectivamente. Conclusiones: La frecuencia de SCCmec I y IV permitirá establecer nuevas medidas en el uso y control de la resistencia a los antibióticos.

ABSTRACT Objective: Typify the SCCmec cassette in methicillin-resistant strains of Staphylococcus aureus in clinical isolates from health centers in the State of Aragua-Venezuela and compare the presence of SCCmec genotypes among the state health centers and according to the type of infection. Materials and methods: 81 MRSA strains from four health centers of the Aragua-Venezuela State were studied. Methicillin resistance was performed with the Kirby-Bauer method with oxacillin (1 µg) and cefoxitin (30 µg) disks. The mecA gene and SCCmec were analyzed by the multiple PCR technique. Results: Only 55 isolates (67.9%) amplified the mecA gene, and 24 strains (43.6%) amplified SCCmec. SCCmec type I was the most frequency, followed by SCCmec IV and SCCmec III, representing 62.5%, 25% and 12.5%, respectively. SCCmec I was predominant in health center A (80%), while in B and C 60% and 100% respectively were SCCmec IV. At health center D, 50% turned out to be SCCmec I and 50% SCCmec IVd. A relationship was found between the SCCmec and the health center with statistical significance. SCCmec I predominated in skin and soft tissue and respiratory infections with 63.2% and 50%, respectively. There was no association between genotype and type of infection with a p value greater than 0.05. Conclusions: The prevalence of SCCmec I and IV will allow establishing new measures in the use of antibiotics and epidemiological control.

Comparación de métodos fenotípico y genotípico en la detección de Staphylococcus aureus meticilino resistente en centros hospitalarios de Pereira / Comparison between phenotype and genotype methods in the detection of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus in Center Hospital of Pereira

Resumen Introducción: Staphylococcus aureus es un importante patógeno, puede causar infecciones leves de piel, hasta enfermedades con compromiso vital. La aparición de Staphylococcus aureus meticilino-resistentes, MRSA; ha aumentado su resistencia antimicrobiana, especialmente a β-lactámicos; dificultando el manejo de las infecciones, aumentando las tasas de morbi-mortalidad, convirtiéndose en un problema de salud pública. La expresión fenotípica de la resistencia suele ser heterogénea, dificultando su detección en el laboratorio por métodos convencionales; lo cual, incrementa los costos en la atención hospitalaria de infecciones por MRSA. Objetivo: Comparar métodos fenotípico y genotípico para la identificación de aislamientos hospitalarios de MRSA en centros hospitalarios de Pereira. Métodos: A partir de aislamientos de S. aureus obtenidos de tres instituciones de salud de alta complejidad clasificadas como A, B y C; se determinó la resistencia a meticilina por concentración mínima inhibitoria en sistemas automatizados y el gen mecA por PCR múltiple. Resultados: La prevalencia fenotípica de MRSA fue 44,4%, la institución A presentó la mayor tasa con 48,65%. La prevalencia genotípica fue 57,4%; en las instituciones A, B y C fue 55,2%, 41,7% y 75%, respectivamente, con diferencia estadísticamente significativa (p<0.05). La sensibilidad y especificidad del método fenotípico fue 99,0% y 94,7%, respectivamente, frente al método gold estándar de la PCR. El índice Kappa fue 0,942 indicando un nivel de concordancia muy bueno entre métodos. Conclusión: La prevalencia de aislamientos MRSA en las instituciones de Pereira fue alta. Los índices de concordancia de los métodos fenotípicos demostraron que son confiables para el diagnóstico de infecciones por MRSA.

Abstract Introduction: Staphylococcus aureus is an important pathogen, can cause mild skin infections, to diseases with compromise vital. The appearance of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus MRSA; It has increased its antimicrobial resistance, especially to β-lactam; hampering the handling of them infections, increasing the rates of morbidity-mortality, becoming a health public problem. The phenotype expression of the resistance tend to be heterogeneous, hindering its detection in the laboratory by conventional methods; which increases costs in the hospital care of MRSA infections. Objective: To compare the phenotypes and genotypes methods for identification of hospital isolates MRSA in Pereira. Methods: From isolates of S. aureus obtained of three high complexity institutions of health classified as A, B and C; determined resistance to Methicillin by minimum inhibitory concentration in automated systems and mecA gene by multiplex PCR. Results: The phenotype prevalence of MRSA was 44.4%, the institution A presented the highest rate with 48.65%. The genotype prevalence was 57.4%; in the institutions A, B and C was 55.2%, 41.7% and 75%, respectively, with difference statistically significant (p < 0.05). The sensitivity and specificity of the phenotype method were 99.0% and 94.7%, respectively, against the gold standard of the PCR method. The Kappa index was 0,942 indicating a very good level of concordance between methods. Conclusion: The prevalence of isolates MRSA in the institutions of Pereira was high. The concordance index of phenotype methods showed that they are reliable for the diagnosis of MRSA infections.

Detección del gen mecA en cepas de Staphylococcus coagulasa positiva aisladas desde gatos / Detection of the mecA gene in coagulase positive Staphylococcus isolated from cats

Introduction: Bacterial resistance is a global concern for public health. Reports of antimicrobial resistance, including that against methicillin, have increased in strains of coagulase positive Staphylococcus (CPS) isolated from pets, however in Chile this information is limited. Objectives: To determine the antimicrobial susceptibility profiles and to detect the mecA gene in CPS strains isolated from cats in Chile. Materials and Methods : 134 samples were obtained from healthy cats and cats with skin lesions. These strains were characterized in their coagulase production and identified by BBL Crystal kit. The antimicrobial susceptibility was determined by Kirby Bauer method against 12 antimicrobials, including oxacillin. All strains were subjected to PCR to detect the mecA gene. Results: 72 CPS strains were isolated, including S. aureus and S. intermedius. Antimicrobial resistance against at least one drug was detected in strains from both healthy cats (75%) and from cats with skin lesions (87.5%). The mecA gene was detected in eight methicillin-resistant strains and also in three sensitive strains, being in general multi-resistant. Discussion: These results highlight the role of pets as reservoirs of bacterial resistance, and their potential impact on national public health.

Introducción: La resistencia bacteriana constituye un tema de preocupación para la salud pública mundial. Últimamente han aumentado los reportes de resistencia a antimicrobianos, incluida meticilina, en cepas de Staphylococcus coagulasa positiva (SCP) aisladas desde mascotas. Sin embargo, en Chile esta información es escasa. Objetivos: Determinar el perfil de susceptibilidad antimicrobiana y detectar el gen mecA en cepas de SCP aisladas desde gatos en Chile. Materiales y Métodos: Se obtuvieron 134 muestras desde gatos sanos y con lesiones dermatológicas. Las cepas fueron caracterizadas en su producción de coagulasa e identificadas mediante kit BBL Crystal. La susceptibilidad antimicrobiana se determinó mediante el método de Kirby Bauer ante 12 antimicrobianos, incluida oxacilina. Todas las cepas fueron sometidas a RPC para la detección del gen mecA. Resultados: 72 cepas de SCP fueron aisladas, incluyendo S. aureus y S. intermedius. Se detectó resistencia antimicrobiana a al menos un antimicrobiano en cepas de gatos sanos (75%) y de gatos con lesiones cutáneas (87,5%). El gen mecA fue detectado en ocho cepas resistentes a meticilina y en tres cepas sensibles, siendo en general multi-resistentes. Discusión: Estos resultados destacan el rol de las mascotas como reservorios de resistencia bacteriana y su potencial impacto en la salud pública.

Staphylococcus aureus con resistencia múltiple a los antibióticos (MDR) en un Hospital de Maracaibo- Venezuela / Multidrug-resistant (MDR) Staphylococcus aureus in a Maracaibo’s hospital, Venezuela

Staphylococcus aureus resistente a oxacilina (SAOR) continúa siendo una causa importante de infecciones nosocomiales en todo el mundo. Se determinó la resistencia a los antibióticos de cepas intrahospitalarias, clasificándolas en multidrogo-resistentes, extensamente drogo-resistentes o pandrogo-resistentes. Las muestras biológicas fueron recolectadas entre septiembre 2013-febrero 2014 y procesadas de acuerdo a técnicas de bacteriología convencional. La resistencia a los antibióticos se determinó mediante el método de difusión con discos en agar y el gen mecA se detectó mediante reacción en cadena de la polimerasa. Se observó baja prevalencia de SAOR intrahospitalario (13,86%). La mayor resistencia fue a eritromicina (66,07%), mientras que la resistencia frente a aminoglucósidos, fluoroquinolonas, clindamicina y tetraciclina fue inferior al 25%; la resistencia frente a trimetoprim/sulfametoxazol fue muy baja y el 100% de las cepas mostraron sensibilidad a rifampicina, linezolid, vancomicina y teicoplanina. El fenotipo de resistencia a MLSB más frecuente fue el de resistencia a eritromicina y susceptibilidad a clindamicina (33,93%, fenotipo MSB). Las cepas SAOR aisladas presentaron 25 antibiotipos diferentes, siendo la mayoría de los aislamientos multidrogo-resistentes (55,36%). No se observó resistencia extensa a los antibióticos ni pandrogo-resistencia y la presencia del gen mecA se demostró en todos los aislamientos resistentes a oxacilina.

Oxacillin-resistant Staphylococcus aureus (ORSA) has remained a major cause of nosocomial infections worldwide. The antibiotic resistance of isolations was determined and we classify them in multidrug-resistant, extensively drug-resistant or pandrug-resistant. The biological samples of patients from a Maracaibo’s Hospital, during September 2013 to February 2014, were processed according to conventional techniques of bacteriology. Antibiotic resistance was determined by disk diffusion method in agar and the mecA gene was detected by polymerase chain reaction. It was observed a low prevalence of nosocomial ORSA (13.86%). The higher antibiotic resistance was observed against erythromycin (66.07%) and a resistance lower than 25% to aminoglycosides, fluoroquinolones, tetracycline and clindamycin. The isolates showed a very low resistance to trimethoprim/sulfamethoxazole and all isolates were susceptible to rifampicin, linezolid, vancomycin and teicoplanin.The majority of isolates had a MSB phenotype (33.93%), with erythromycin resistance and susceptibility to clindamycin. The ORSA isolates in this study had 25 different antibiotypes and the majority of them were multidrug-resistant (55.36%). There was not both extensively drug-resistant and pandrug-resistant isolates and the presence of the mecA gene was demonstrated in all isolates of ORSA.

Staphylococcus coagulasa-negativa clínicamente significativos: Especies más frecuentes y factores de virulencia / Clinically significant coagulase-negative staphylococci: Most frequent species and virulence factors

Coagulase-negative staphylococci have emerged as responsible for a large number of infections. However, it is often difficult to assess its pathogenic role or to discard it as a contaminant. Aim: The goal of this study was to identify clinically significant coagulase-negative staphylococci to the species level and their virulence factors. Isolates came from patients consulting at the San Roque Laboratory from 2009 to 2011. Material and Methods: Species identification was performed by De Paulis et al simplified method. Production of biofilm, hemolysins, lipases, lecithinases and DNase were determined by conventional methods; methicillin-resistance by diffusion method and mecA and Panton-Valentine genes, by multiplex PCR. Results: Out of 64 isolates, 40.6% were S. epidermidis; 20.3%, S. haemolyticus, and 15.6%, S. lugdunensis. Biofilm production was detected in 73.1% of S. epidermidis, 53.8% of S. haemolyticus and 40% of S. lugdunensis. mecA gene was identified in 69.2% of S. epidermidis, 92.3% of S. haemolyticus and none of S. lugdunensis. 83% of mecA (+) S. epidermidis isolates were biofilm producers as compared to 50% of the mecA (-). Conclusion: The frequency of S. lugdunensis, the most virulent coagulase-negative staphylococci species, was relatively high. The main virulence factor in S. epidermidis was biofilm production, being higher in those resistant to methicillin.

Staphylococcus coagulasa-negativa ha emergido como responsable de un gran número de infecciones. No obstante, con frecuencia es difícil asegurar su rol patógeno o descartarlo como contaminante. Objetivo: Estudiar a nivel de especies Staphylococcus coagulasa-negativa clínicamente significativos y sus factores de virulencia, de aislados provenientes de pacientes del Laboratorio San Roque de Asunción, Paraguay entre los años 2009 y 2011. Material y Métodos: Para la identificación de especies fue utilizado el método simplificado de De Paulis y cols. La producción de biopelícula, hemolisinas, lipasas, lecitinasas, AD-Nasa, fue determinada por métodos convencionales; la resistencia a meticilina por difusión y los genes mecA y Panton-Valentine por RPC múltiple. Resultados: De 64 aislados, 40,6% correspondió a S. epidermidis, 20,3% S. haemolyticus y 15,6% S. lugdunensis. La producción de biopelícula fue detectada en S. epidermidis en 73,1%, S. haemolyticus 53,8% y S. lugdunensis 40%. El gen mecA fue identificado en 69,2% de S. epidermidis, 92,3% de S. haemolyticus y en ninguno de S. lugdunensis. El 83% de S. epidermidis mecA (+) fue productor de biopelícula en comparación a 50% de los mecA (-). Conclusión: La frecuencia de S. lugdunensis, una de las especies más virulentas de Staphylococcus coagulasa-negativa fue relativamente alta; y el principal factor de virulencia en S. epidermidis fue la producción de biopelícula, siendo mayor en los resistentes a meticilina.

Caracterización del gen mecA de Staphylococcus aureus resistentes a meticilina aislados de tres grupos poblacionales de la ciudad de Medellín / Characterization of mecA gene of methicillin-resistant Staphylococcus aureus Isolated from three population groups in Medellín

Introducción: Staphylococcus aureus resistente a la meticilina (SARM) es responsable de infecciones intrahospitalarias, las que constituyen una importante causa de morbilidad y mortalidad en nuestro medio, por lo cual la rápida identificación y tipificación molecular de la resistencia como el complejo SSCmec es esencial para entender la epidemiología de la infección. Objetivo: Caracterizar fenotípicamente la resistencia a meticilina y genotípicamente el casete cromosomal SSCmec en cepas de S. aureus aislados de individuos de la ciudad de Medellín mediante PCR múltiple. Materiales y métodos: A 41 aislamientos (hospitalarios y de la comunidad) de S. aureus se les estableció la resistencia a cefoxitin mediante la técnica de Kirby-Bauer y la concentración inhibitoria mínima para oxacilina. Mediante PCR convencional se les confirmó la presencia del gen mecA. Para la tipificación del complejo SSCmec se utilizó PCR múltiple para amplificar 6 loci diferentes de este gen. Resultados: A todos los aislamientos se les confirmó resistencia a meticilina y la presencia del gen mecA, de los cuales 17 fueron clasificados como SSC mec I, 1 como SSC mec II, 21 como SSC mecIV; dos aislamientos no fue posible clasificarlos. Conclusiones: Con el uso de esta técnica clasificamos el 95% de los aislamientos del estudio, encontrando una mayor prevalencia de los SSCmec I y IV. La implementación de esta técnica permite una fácil caracterización de los aislamientos SARM y un apropiado manejo de la información de los integrantes de los comités de infecciones hospitalarios, lo cual podría impactar positivamente en el tratamiento a los pacientes y el control de enfermedades infecciosas intrahospitalarias.

Introduction: Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) is involved in nosocomial infections, representing an important cause of morbidity and mortality. The rapid identification and molecular classification of resistance, such as the SSCmec complex, is essential to understanding the epidemiology of infection. Objective: To phenotypically characterize methicillin resistance and to genotype the SSCmec complex in S. aureus isolates collected from a cohort of patients from Medellín, Colombia. Materials and Methods: Cefoxtin resistance was evaluated in 41 S. aureus isolates, using the Kirby-Bauer method and determining the minimal bactericidal concentration of oxacillin. To confirm the presence of the mecA gene, conventional PCR was performed. The classification of the SSCmec complex was carried out by multiple PCR, amplifying 6 different loci in this gene. Results: Methicillin resistance and the presence of the mecA gene were confirmed in all isolates. A total of 17 were classified as SSCmec I, one as SSCmec II, and 21 SSCmec IV (only two isolates were not classified). Conclusions: Using this method, it was possible to classify 95% of the studied isolates, with a higher prevalence of SSCmec I and IV. The implementation of this technique allows the characterization of MRSA isolates and an appropriate management of the information by the members of the Hospital Infection Committee. Altogether, this method may have a positive impact on the treatment of patients with MRSA infections.